肿瘤免疫治疗虽发展迅速且成果显著，但恶性肿瘤可通过构建免疫抑制微环境逃避免疫监视，这一问题严重制约治疗效果。PD-1、CTLA-4等免疫检查点分子及其在肿瘤免疫逃逸中的作用被揭示后，明确免疫细胞与癌细胞的相互作用成为开发新型免疫疗法的核心前提。多重免疫荧光（mIF）是一种可靠的高通量方法，能够直接观察单个细胞表达的多种生物标志物，并分析不同细胞群体中这些标志物的空间关系，这是传统的免疫组织化学（IHC）技术无法实现的。因此，研究《Immuno-profiling and cellular spatial analysis using five immune oncology multiplex immunofluorescence panels for paraffin tumor tissue》通过组合精心筛选的抗体，可识别多种细胞亚群。采用酪氨酸信号放大（TSA）手动方案作为验证多重染色的标准参照 。通过自动化染色仪将最初手动方案 4-5 天的染色时间大幅缩短至 14-17 小时，同时提升了染色一致性。文献展示了自动化TSA染色的优化过程与可重复性，并在一小队列非小细胞肺癌（NSCLC）样本中，验证了其在肿瘤微环境研究及细胞表型空间分布分析中的应用价值。

肾移植后的延迟移植肾功能（DGF）是肾脏移植后常见并发症，定义为移植后7天内需要透析，是慢性肾移植损伤的一个重要危险因素。而间质纤维化和肾小管萎缩（IFTA）是慢性肾损伤的典型表现。然而，并非所有DGF患者都会进展为IFTA，二者间的复杂关联尚未明确，核心瓶颈在于传统评估方法难以精准量化炎症浸润特征，无法早期识别IFTA进展的预测标志物。传统组织学评估依赖病理医师主观判断，准确性受经验影响大，且无法同时捕获多类免疫细胞的表型、密度及空间分布信息，制约了对炎症微环境与移植物预后关联的深入探究。《Quantitative assessment of inflammatory infiltrates in kidney transplant biopsies using multiplex tyramide signal amplification and deep learning》聚焦肾脏移植活检中炎症浸润的定量评估技术革新，旨在解决延迟移植肾功能患者间质纤维化和肾小管萎缩进展预测的临床难题，通过技术融合实现炎症浸润的精准量化分析。

近年来，肿瘤微环境（TME）的复杂免疫景观解析成为精准肿瘤学的研究核心，而常规临床仍依赖 H&E 染色和单一标志物显色 IHC 检测，该方法存在组织浪费、无法同步评估多标志物、不适用于定量和空间分析等局限，难以满足肿瘤微环境研究及免疫治疗响应预测需求。肿瘤微环境的细胞丰度与空间排列影响肿瘤进展及治疗响应，单一 IHC 评估 PD-L1 表达预测免疫治疗响应时，存在可重复性差、无法明确表达细胞类型及定量空间排列等问题，而多重染色能同步靶向多种蛋白质，通过荧光或显色染色实现，可表征标志物共表达谱和空间排列，在预测免疫治疗响应上优于多种检测方法，且在肿瘤微环境研究、生物标志物空间异质性分析、解决小样本多标志物检测难题及临床试验患者分层等方面具有广泛应用价值，其优化和实施难度不断降低，更适合常规临床使用。《Multiplex Immunohistochemistry and Immunofluorescence: A Practical Update for Pathologists》是一篇面向病理医师的综述类文献，聚焦多重免疫组织化学（mIHC）与多重免疫荧光（mIF）技术，聚焦多重免疫组织化学（mIHC）与多重免疫荧光（mIF）技术，通过在同一切片上同时检测多个生物标志物，极大地提升了病理诊断的信息量与精准度。目前，实现多重检测的技术路径主要包括基于 TSA 等方法的多重 IHC / 免疫荧光、质谱成像及数字空间分析（DSP），以及通过连续切片配准实现的虚拟多重染色。尽管这些技术在标准化流程与数据分析方面仍面临挑战，但随着数字病理技术的成熟，多重染色已逐渐具备临床转化的可行性，有望在不久的将来成为指导肿瘤免疫治疗决策的常规手段。

STING 在癌组织中呈多细胞类型表达特征，涵盖淋巴细胞、自然杀伤细胞、内皮细胞及上皮细胞等。当前癌症领域 STING 表达研究多基于 RNA 水平，难以区分细胞特异性表达差异，且关于STING在肿瘤细胞与肿瘤相关炎症细胞中的临床意义尚未完全明确。基于此，发表于《Pathology》上的一篇题为《High-level STING expression in tumour and inflammatory cells is linked to microsatellite instability and favourable tumour parameters in a cohort of over 1,900 colorectal cancer patients》的研究论文，通过多重荧光免疫组化（mIHC）技术，定量分析STING在结直肠癌不同细胞类型中的表达，并探究其与临床病理特征的关联。为结直肠癌的免疫机制研究和潜在治疗靶点探索提供了重要依据。

TSA技术的核心原理是辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗在过氧化氢存在下，催化荧光标记的酪酰胺转化为活性形式，后者共价结合于靶抗原附近的酪氨酸残基，实现信号的级联放大。研究选用Opal荧光染料作为标记物，相比传统荧光二抗，其信号灵敏度显著提升，且可在低激光功率下成像，减少组织光漂白。

前期研究发现，CM维持治疗对TNBC患者复发风险的降低无显著统计学意义，但sTILs水平较高（>500）的患者接受CM维持治疗后，乳腺癌复发风险降低更为明显。基于此，Rusakiewicz S等人通过6重免疫荧光染色技术表征TNBC患者的免疫细胞浸润特征，评估特定免疫细胞亚群的预后价值和对CM维持治疗疗效的预测作用，同时分析免疫细胞的空间分布特征对治疗疗效和患者预后的影响，为TNBC患者的精准治疗策略制定提供依据。

近年来，免疫检查点抑制剂（ICIs）在乳腺癌治疗中展现出潜在价值，但不同患者的治疗响应存在显著差异。肿瘤免疫微环境（TIME）的特征是影响 ICIs 疗效的关键因素，目前针对乳腺癌患者 PD-L1 抑制剂治疗响应的预测生物标志物仍缺乏系统且精准的界定，尤其是不同受体亚型乳腺癌的治疗响应机制差异尚未完全阐明。近年发展的新型检测技术可同步评估多种标志物并完整保留细胞原位空间关系，正被广泛应用于肿瘤免疫微环境表征与免疫相关生物标志物的挖掘，其中多重免疫荧光（mIF）技术在多种肿瘤 ICI 疗效预测中的应用价值，显著优于基因表达特征、肿瘤突变负荷及标准化 PD-L1 免疫组化检测。

开发了多重显色免疫组织化学方案，用于跨物种淋巴结免疫细胞的比较研究，并在猪组织中验证了荧光多重染色检测蛋白共定位信号的能力。鉴于动物中蛋白反应性抗体的稀缺性和制备难度，研究进一步提出通过 RNA 水平设计靶向原位目标的免疫试剂，并与物种抗体染色进行多重组合，以突破原位检测中免疫试剂的限制。为证实 RNA 与蛋白联合检测在阐释组织状态和免疫病理学中的作用，研究在猪扁桃体组织中实现了细胞特异性蛋白标志物与塞内卡病毒 A（SVA）RNA 的联合染色。

在细胞培养的世界里，胰酶（Trypsin）就像是那个“拆解者”。它能温和地切断细胞间的连接，让我们可以将细胞吹打下来制成单细胞悬液。为了满足不同的实验需求，市面胰酶的配方（浓度、EDTA、酚红）也是丰富多变的，到底该怎么选？别急，这就为您梳理一份《实验室胰酶使用指南》